产品货号:
MT2002
中文名称:
染料法qPCR预混液
英文名称:
2×BAPA3G SYBR qPCR Mix
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR预混液,将化学修饰的热启动BAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起。本制品配有单独的ROX内参染料,可用于需要ROX进行孔间校正的定量PCR仪。
本预混液采用电子进化改造的第三代DNA聚合酶,其对杂质的耐受性能明显提升,包括乙醇、胍盐、肝素、SYBR Green染料、MLV,因此无论采用基因组DNA、反转录cDNA、纯度欠佳的核酸样本都具有理想的扩增效果。优化的反应Buffer和100%热启动性能,确保该试剂在信噪比、循环域值、线性度和灵敏度方面具有绝佳的性能。
- 杂质高耐受性,使用各种gDNA和cDNA,具有最佳的扩增成功率。
- 高灵敏度,宽范围的动态检测(>7个数量级)。
- 反应效率在95~110%之间,高准确度和重现性。
- 扩增程序40min内完成,具有10s扩增1kb的快速能力。
- 在不同的富含AT和GC目标物上产生更高的荧光检测。
RNA转录产物cDNA、基因组DNA、DNA病毒等相对定量检测。
组分 | 1mL | 5mL |
2×BAPA3G SYBR qPCR Mix | 1mL | 5×1mL |
50×ROX Reference Dye | 200μL | 200μL |
保存:-20℃避光,有效期3年。
图1.以人Hela Total RNA的反转录产物进行GAPDH基因的定量PCR检测(7个数量级),模板量分别为100ng、10ng、1ng、100pg、10pg、1pg、100fg。结果可见2×BAPA3G SYBR qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能。R2=0.999;Eff%=101;Error=0.025。
- 根据PCR仪型号选择步骤a或b配制反应体系
- 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪,包括:ABI PRISM7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系:
成分 用量 终浓度 2×BAPA3G SYBR qPCR Mix 10μL 1× 50×ROX Reference Dye 0.4μL 1× 正向引物(10μM) 0.4μL 0.2μM 反向引物(10μM) 0.4μL 0.2μM DNA模板 0.5~2μL - ddH2O 至20μL - - 引物用量有时可提高到0.8μL以提高扩增效率。
- 无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪,包括:LightCycler (Roche Diagnostics);CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ);Line-Gene(Bioer,杭州博日)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系:
成分 用量 终浓度 2×BAPA3G SYBR qPCR Mix 10μL 1× 正向引物(10μM) 0.4μL 0.2μM 反向引物(10μM) 0.4μL 0.2μM DNA模板 0.5~2μL - ddH2O 至20μL -
- 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪,包括:ABI PRISM7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系:
- 设置反应程序
进行Real-Time PCR反应,通常采用两步法,程序如下:步骤 温度 时间 循环数 Stage 1 95℃ 5min 1 Stage 2 95℃ 10s 40 60℃ 20s Stage 3 Dissociation analysis - 使用的BAPA3G DNA聚合酶为化学修饰的热启动,必须于95℃加热5分钟才能完全恢复酶的活性,热启动步骤的时间不能缩短。
- 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。
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