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染料法qPCR预混液图片
产品货号:
MT2002
中文名称:
染料法qPCR预混液
英文名称:
2×BAPA3G SYBR qPCR Mix
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR预混液,将化学修饰的热启动BAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起。本制品配有单独的ROX内参染料,可用于需要ROX进行孔间校正的定量PCR仪。


本预混液采用电子进化改造的第三代DNA聚合酶,其对杂质的耐受性能明显提升,包括乙醇、胍盐、肝素、SYBR Green染料、MLV,因此无论采用基因组DNA、反转录cDNA、纯度欠佳的核酸样本都具有理想的扩增效果。优化的反应Buffer和100%热启动性能,确保该试剂在信噪比、循环域值、线性度和灵敏度方面具有绝佳的性能。




  • 杂质高耐受性,使用各种gDNA和cDNA,具有最佳的扩增成功率。
  • 高灵敏度,宽范围的动态检测(>7个数量级)。
  • 反应效率在95~110%之间,高准确度和重现性。
  • 扩增程序40min内完成,具有10s扩增1kb的快速能力。
  • 在不同的富含AT和GC目标物上产生更高的荧光检测。



RNA转录产物cDNA、基因组DNA、DNA病毒等相对定量检测。


组分1mL5mL
2×BAPA3G SYBR qPCR Mix1mL5×1mL
50×ROX Reference Dye200μL200μL

保存:-20℃避光,有效期3年。


HT3G SYBR qPCR Mix
图1.以人Hela Total RNA的反转录产物进行GAPDH基因的定量PCR检测(7个数量级),模板量分别为100ng、10ng、1ng、100pg、10pg、1pg、100fg。结果可见2×BAPA3G SYBR qPCR Mix在7个数量级的动态检测中表现出卓越的扩增性能。R2=0.999;Eff%=101;Error=0.025。


  • 根据PCR仪型号选择步骤a或b配制反应体系
    • 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪,包括:ABI PRISM7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系:
      成分用量终浓度
      2×BAPA3G SYBR qPCR Mix10μL
      50×ROX Reference Dye0.4μL
      正向引物(10μM)0.4μL0.2μM
      反向引物(10μM)0.4μL0.2μM
      DNA模板0.5~2μL-
      ddH2O至20μL-
      • 引物用量有时可提高到0.8μL以提高扩增效率。
    • 无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪,包括:LightCycler (Roche Diagnostics);CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ);Line-Gene(Bioer,杭州博日)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系:
      成分用量终浓度
      2×BAPA3G SYBR qPCR Mix10μL
      正向引物(10μM)0.4μL0.2μM
      反向引物(10μM)0.4μL0.2μM
      DNA模板0.5~2μL-
      ddH2O至20μL-
  • 设置反应程序
    进行Real-Time PCR反应,通常采用两步法,程序如下:
    步骤温度时间循环数
    Stage 195℃5min1
    Stage 295℃10s40
    60℃20s
    Stage 3Dissociation analysis
    • 使用的BAPA3G DNA聚合酶为化学修饰的热启动,必须于95℃加热5分钟才能完全恢复酶的活性,热启动步骤的时间不能缩短。
  • 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

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